广州西地那非含量检测 他达那非含量测试   

1 范围

本标准规定了食品中伐地那非、西地那非、他达那非的液相色谱-质谱/质谱检测方法。

本标准适用于片剂、胶囊剂和口服液剂类食品中伐地那非、西地那非、他达那非的检测。 

2 测定方法

2.1 方法提要

片剂、胶囊剂试样中的伐地那非、西地那非、他达那非用甲醇超声提取，提取液经稀释后过滤。口服溶液剂经钟稀释后过滤，用配有电喷雾离子源的液相色谱-质谱/质谱仪进行测定，外标法定量。

2.2 试剂和材料

所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为二次蒸馏水。

2.2.1 乙腈：高效液相色谱级。

2.2.2 甲醇：高效液相色谱级。

2.2.3 冰乙：优级纯。

2.2.4 ：优级纯。

2.2.5 0.1 mol/L+甲醇混合液(9+1，体积比)。

2.2.6 伐地那非(vardenafil, CAS号：224785-90-4，分子式：C23H32N6O4S·HCl·3H2O)标准品：纯度大于等于99.5%。

2.2.7 西地那非(Sildenafil, CAS号：139755-83-2，分子式：C22H30N6O4S)标准品：纯度大于等于99.5%。

2.2.8 他达那非(tadalafil, CAS号：171596-29-5，分子式：C22H19N3O4)标准品：纯度大于等于99.5%。

2.2.9 标准溶液：分别准确称取适量伐地那非、西地那非、他达那非标准品，用甲醇配制成浓度为10 ug/mL的混合标准储备液，于4℃下保存。根据需要用0.1mol/L+甲醇混合液(2.2.5)将标准储备液稀释成1 ng/mL、2 ng/mL、4 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的混合标准工作溶液。

2.3 仪器和设备

2.3.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：三重四极杆质谱检测器，配电喷雾离子源(ESI)。

2.3.2 超声波清洗器。

2.3.3 旋涡混匀器。

2.3.4 电子天平：感量1 mg。

2.3.5 研钵。

2.4 测定步骤

2.4.1 试样的制备

2.4.1.1 片剂

随机取同一批号的供试品20片，研细为试样。

2.4.1.2 硬胶囊

随机取同一批号的供试品20粒，倾出所有内容物，研细为试样。

2.4.1.3 软胶囊

随机取同一批号的供试品20粒，将内容物全部挤到一离心管中，充分混匀后，作为试样。

2.4.1.4 口服溶液剂

随机抽取同一批号的供试品10支(瓶)，取等量体积样品到同一容器中混匀，作为试样。

2.4.2 提取

2.4.2.1 片剂、硬胶囊、软胶囊试样

称取1 g试样(**到0.01g)于100 ml、容量瓶中，加入90 mL甲醇，盖上盖混匀，置于超声波清洗器中超声1h，冷却至室温后用甲醇定容至刻度，混匀。取1.0 mL于10 mL容量瓶中，用0.1 mol/L+甲醇混合液(2.2.5)定容后混匀，溶液过0.45 um微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

2.4.2.2 口服溶液剂

准确移取1.0 mL试样于10 mL容量瓶中，用0.1 mol/L+甲醇混合液(2.2.5)定容，混匀，溶液过0.45um微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

2.4.3 测定

2.4.3.1 液相色谱-质谱/质谱条件

a)色谱柱：柱填料为十八烷基硅烷键合相的色谱柱，2.1×150 mm, 5 um或相当者;

b)流动相：梯度洗脱程序见表1;

c)流速：0.20 mL/min;

d)柱温：40℃;

e)进样量：10 uL;

f)离子源：电喷雾离子源;

g)扫描方式：正离子;

h)检测方式：多反应监测(MRM) ;

i)雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气等气体使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求;

j)喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至灵敏度;

k)监测离子对(m/z)：他达那非390.4/268.3(定量离子对)、390.4/135.1、390.4/169.1;西地那非475.3/100.1(定量离子对)、475.3/58.0、475.3/311.4;伐地那非489.5/151.1(定量离子对)498.5/72.1、489.5/312.1。